Thursday, February 15, 2007

buňky

Metoda vychází ze základního empiricky ověřeného předpokladu, že z 1 životaschopné buňky vyrůstá 1 kolonie. Pojmem „životaschopnost“ se v tomto případě rozumí schopnost buňky vytvářet na agarovém živném mediu viditelné makroskopické kolonie. Zaočkování inokula do agarového média je možno provádět dvěma způsoby: 1. očkováním inokula (nejlépe v objemu do 0,5 ml) na předsušené agarové plotny a jeho rozetřením sterilní hokejkou nebo 2.zalitím potřebného objemu inokula (nejčastěji 1ml) vytemperovaným agarem a důkladným rozmícháním. Druhou metodou je možnou použít i pro stanovení anaerobů (kultivace pod parafinem). Výsledek se udává jako počet kolonie tvořících jednotek (KTJ, angl. zkratka CFU – colony forming unit), což zahrnuje i fakt, že některé kolonie nevznikly z jedné buňky.

Suspenzi je nutné před očkováním ředit, aby na tuhém mediu vyrostly jednotlivé kolonie, které se nepřekrývají svými okraji. Obvykle se používá při ředění koeficient 10, buňky se vyřeďují postupně, aby se zabránilo rozbití buněk osmotickým šokem. Pro určení optimálního konečného zředění je nutno odhadnout hustotu suspenze (0-103 buněk/ml bez opalescence, 105/ml lehce opaleskuje, 107-109/ml tvoří mléčný zákal, závisí na tvaru a velikosti buněk).

Labels: